تکثیر ،کلونینگ و بیان ژن نوترکیب bp۲۶( omp۲۸ )باکتری b‏. melitensisجدا شده از استان مرکزی و تخلیص پروتئین bp۲۶

مقدمه و هدف: بروسلوز بیماری ناتوان کننده ای است که و هزینه گزافی را بر اقتصاد و اجتماع تحمیل می کند . بنابراین استفاده از بهترین ، دقیق ترین و به صرفه ترین روش برای تشخیص این بیماری ضروری می باشد . عامل شایع بروسلوز در ایران b. melitensis بوده و پروتئین bp26 این باکتری خاصیت آنتی ژنیسیته خوبی دارد. بنابراین هدف از این تحقیق تولید پروتئین bp26 نوترکیب از باکتریb. melitensis توسط وکتور بیانیpet-28a می باشد .  موادوروش کار: در این مطالعه از باکتری کشت شده تخلیص dna ژنومیک به روش پروتئیناز k و فنل/کلرفرم ، انجام شد .سپس با توجه به اطلاعات توالی ژن bp26 b. melitensis موجود در بانک اطلاعات ژن ، برای ژن مذکور پرایمر طراحی شده و واکنش pcr راه اندازی، بهینه سازی و انجام شد. در ادامه محصول pcrابتدا در وکتور ptz57r/t الحاق گردید و پس از آن در وکتور pet-28aکلون گردید . وکتور نوترکیب به میزبان e. coli bl21(de3) منتقل گردید و پروتئین نوترکیب و با ستون کروماتوگرافی ni-nta علیه his tag تخلیص گردید . نتایج وبحث: اندازه ژن به دست آمده از واکنش زنجیره ای پلیمراز با اندازه بخشی از ژنbp26 b. melitensis موجود در بانک اطلاعات ژن مطابقت داشت . ژن bp26 بدون القاء با iptg به میزان کم بیان شده و با افزودن آن به غلظت mm 1 به محیط کشت در ساعت سوم ، حداکثر بیان را مشاهده نمودیم . تولید پروتئین نوترکیب bp26 از باکتری b. melitensis بومی استان مرکزی با استفاده ازناقل پلاسمیدی pet-28a امکان پذیر گردید . با توجه به اهمیت این پروتئین و به منظور بررسی های بیشتر در آینده ، امکان تولید آن در کشور فراهم شد .